SAT平台

SAT(核酸恒温扩增实时荧光检测技术)是一种新型RNA检测技术。

该技术为我国自主创新的RNA检测技术，是目前CFDA批准的核酸恒温放大实时荧光检测技术产品，拥有两项核心发明专利技术

一、SAT法提取和扩增检测原理

特异性靶标捕获技术（特异磁珠法，中国专利号：200810111478.6）：

磁珠微粒表面标记oligo（dT），在该段oligo（dT）上连接带有一段oligo（dA）的特异性的核酸捕获片段。

当捕获探针与靶标核酸结合后，用磁铁吸附磁珠，即可将靶标核酸特异性的提取出来。

技术特点：较大限度去除杂质，获得高纯度产物

二、RNA实时荧光恒温扩增检测技术 （Simultaneous Amplification and Testing, 中国专利号：200810111479.0）

靶标RNA在RT酶作用下逆转录合成一条带T7启动子的双链DNA，T7 RNA聚合酶以这条双链DNA为模板进行转录,每个cDNA分子可以转录出100~1000个拷贝的RNA，合成出的RNA与分子信标结合，发出荧光，可以被荧光检测仪检测到。与此同时，新合成的RNA继续在RT酶和T7 RNA聚合酶的作用下循环逆转录和转录的过程。如此往复，以达到高效扩增的目的。

三、目前病原体检测常用的实验室检测方法及特点

检测方法	检测样本	特点
细菌培养	痰液 / 拭子	慢培时间过长，对临床要求的快速准确检测结果意义相对较小；快培杂菌过多特异性过低，准确率低，易漏检误检；
免疫法	血清	取样和操作简单，但存在较长的“窗口期” ，导致假阳性率过高；无法区分既往感染，导致假阳性问题
PCR	痰液 / 咽拭子	高灵敏度和高特异性，不能区分“死菌”“活菌”，病原体持续存在导致假阳性问题
SAT	痰液 / 咽拭子	高灵敏度和高特异性，缩短窗口期；可区分“死菌”“活菌”，避免假阳性

表1 临床常用检测方法

四、SAT法与PCR、RT-PCR方法学比较

	SAT	PCR	RT-PCR	SAT对应优势
起始模板	RNA	DNA	RNA	相较于DNA,RNA在病原体内数量为1000~1000条，起始模板多，灵敏度高
扩增原理	逆转录-转录	复制	逆转录→复制	不同的扩增原理，SAT在灵敏度、特异性、扩增时间等上更有优势
特异性	非常高	高	高	磁珠提取法，特异性探针靶标捕获最大程度上去除反应抑制剂，提高反应特异性； SAT的扩增原理后期是转录，使得扩增的特异性高；分子信标检测，使得检测特异性更高。高灵敏度，不影响高特异性。
区分死菌 / 活菌	能	不能	能	DNA不容易降解，RNA容易降解。菌体死亡后前者短期内不可判愈，后者可以。前者有假阳性

表2 SAT法与PCR、RT-PCR方法比较

※SAT与PCR检测技术的方法学优势

1. 病原体死亡后RNA可以很快降解，避免因菌体死亡后DNA持续存在导致的假阳性；检测靶标为RNA,扩增起始模板数量高，所以灵敏度更高，避免假阴性；

2. 磁珠法进行核酸提取，特异性磁珠捕获可以最大限度去除杂质，抑制物少，提高特异性。

3. 用分子信标进行检测，提高特异性。

4. 扩增产物为RNA，产物易降解，减少实验室污染风险，进一步降低假阳性风险。